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香山濕地日本鰻草海草床中脫氮細菌的分離和特性研究

為了解決ga口紅208的問題，作者羅政為 這樣論述：

脫氮作用為氮循環中的一個重要環節，具有脫氮能力的細菌在自然界的脫氮作用中扮演著非常重要的角色，脫氮細菌的種類繁多，其中有許多種類在沿海河口生態系中能夠大量的移除含氮汙染物。本研究針對生長在台灣香山濕地河口的日本鰻草，其根圈沉積物中脫氮細菌菌相進行研究。使用最大可能計數法(most-probable-number counts) 和 PYN ( polypepton-yeast-nitrate) 液體培養基估算日本鰻草根圈沉積物中的脫氮菌數。估得脫氮細菌在根圈沉積物中的菌數介7.5 x 103至1.5 x 105cells/g wet wt. 間。並且由沉積物樣本中分離得到65株脫氮菌分離株。

65株脫氮菌分離株進行各種生理生化特性檢測後發現，所有分離株皆屬於革蘭氏陰性菌，其中33株具鈉鹽需求性，應屬於海洋原生種細菌。65株分離株進行16S rRNA基因定序，分析定序結果後，脫氮菌分離株分別屬於9個菌屬，其中以 Marinobacter 和 Shewanella 兩菌屬為主要組成。根據16S rRNA序列比對結果，分離株A41與最相近標準株 Halomonas mongliensis的序列相似度為97.6%，以及B10-1與最相近標準株Pseudoalteromonas shioyasakiensis 的序列相似度為98.3% ，皆明顯低於可區分細菌種與種間的閾值 (98.65%)

，分離株A41及 B10-1的生理生化特性也與其相關標準株有明顯不同。在多元分類探討的前提下，初步研判分離株A41及B10-1有可能為新種的脫氮細菌。在脫氮基因研究方面，利用亞硝酸根還原酶 (nitrite reductase) 基因 (nirK 和 nirS) 中的保守區域引子對，透過聚合酶連鎖反應 ( polymerase chain reaction) 分析亞硝酸根還原酶基因序列的多樣性。在本實驗中，歸類為Escherchia, Shewanella, Photobacterium, Pseudoalteromona和 Marinobacter分群之細菌可檢測出nirS基因，可成功定序的

分離株之nirS 基因序列經分析後，與NCBI資料庫中最相近的基因序列相似度都在95 % 以上。屬Vibrio和Ochrobactrum 分群之細菌則具有nirK基因，可成功定序的分離株之nirK 基因序列經分析後，與NCBI資料庫中最相近的可培養菌株基因序列相似度則低於84%。