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香杉芝之菌絲體與固態發酵產品及其生理活性物質

為了解決小v鬆餅機缺點的問題，作者恩和 這樣論述：

香杉芝(Antrodia salmonea）為台灣特有真菌，寄生於香杉木，其新鮮子實體為鮭魚粉色，平伏貼生在香杉芝樹幹之中空內面。台灣民間早已將香杉芝與樟芝子實體用於治療腹瀉、腹部疼痛、高血壓和皮膚瘙癢、也被用當作肝癌之解毒劑等。近年來研究發現，香杉芝子實體與菌絲體萃取物具有抗氧化、抗腫瘤和抗發炎之功效，以及能夠對人類白血球細胞產生抗氧化作用。本研究首先利用分子生物技術來鑑定香杉芝菌種；再探討香杉芝穀類(蕎麥、燕麥、胚芽米和小麥)之固態培養條件，並分析培養所得菌絲體及固態發酵產品之品質特性、抗氧化性質和對抗發炎反應之評估；另外，以香杉芝燕麥餵食小鼠，進行 28 天食用安全性試驗以確定其食用安

全性。首先利用ITS1-5.8S-ITS2序列及LSU rDNA D1-D3部分序列分析，並與NCBI基因庫進行比對，鑑定香杉芝之菌種。實驗結果發現，香杉芝之ITS1-5.8S-ITS2序列長度為808 bp，將此序列與基因序列資料庫PubMed提供之軟體BLAST進行比對，其序列分數最高之前4筆之3筆為A. salmonea，而相似度99% 另外 另外進行LSU rDNA D1-D3部分序列分析以長度為913；，bp 之LR5/LROR當引子對，將此序列與基因庫進行比對，其序列分數最高之前4筆是A. salmonea，而最大相似度99%。另將本菌種之ITS及LSU序列與BCRC 36937（

A. salmonea）自行定序之序列進行比對，發現其序列相似度皆為100% 根據菌落型態 分生孢子及扣子體等型態特徵及其特殊氣味。、，並依據 rDNA ITS1-5.8S-ITS2和LSU rDNA D1-D3 序列分析結果，鑑定本研究使用之菌株確為香杉芝(A. salmonea)。一般人工栽培香杉芝，由接種到生成子實體需耗費很長的時間；若應用發酵技術生產菌絲體，其發酵時間短且品質穩定。本研究旨在探討香杉芝穀物之固態培養，並評估菌絲體之最適培養基組成條件。結果顯示，在10%接種量及28天固態培養時間之條件下，以果糖為碳源；而黃豆粉為蕎麥、燕麥和小麥之氮源，酵母抽出物為胚芽米基質的氮源、不調酸

鹼值並於 25°C培養，可獲得最高菌絲體產量（香杉芝蕎麥 325.27 mg/g、香杉芝燕麥 324.97 mg/g、香杉芝胚芽米 311.31 mg/g 及香杉芝小麥 351.27mg/g）。本研究進一步探討香杉芝菌絲體及香杉芝穀物固態發酵產品之非揮發性呈味成分和生理活性物質。結果發現，一般成分中，香杉芝菌絲體含有較高量之脂肪及蛋白質，而固態發酵產品則含有較高量之碳水化合物。在生理活性物質方面，香杉芝菌絲體之麥角固醇、麥角硫因及腺苷含量，分別為 3450、320.9 和 529.8 µg/g，而固態發酵產品方面，香杉芝蕎麥與香杉芝燕麥之麥角硫因含量(119.8 及 110.4 µg/g)高於

香杉芝胚芽米(97.1 µg/g)及香杉芝小麥(81.0 µg/g)。在非揮發性呈味成分方面，香杉芝菌絲體之總可溶性糖含量（51.99 mg/g）高於香杉芝蕎麥（34.24 mg/g）、香杉芝小麥(29.4 mg/g)、香杉芝胚芽米(28.88 mg/g)及香杉芝燕麥(25.68 mg/g)。而香杉 芝 菌 絲 體 及 固 態 發 酵 產 品 之 總 游 離 胺 基 酸 的 含 量 分 別 為 13.13 和6.97~12.99 mg/g。另外，菌絲體之總 5''-核苷酸和呈味 5''-核苷酸含量，皆高於固態發酵產品。以等價鮮味值來看，香杉芝菌絲體及香杉芝燕麥分別相當於 167 和 80.83

g/100 g 的 MSG;整體而言 香杉芝菌絲體具有強的鮮味，，而香杉芝穀類發酵發酵產品亦有不錯之鮮味。香杉芝之菌絲體和固態發酵產品，探討其熱水和 70%乙醇萃取物之抗氧化性質及所含之抗氧化成分。結果顯示，香杉芝菌絲體之抗氧化性質優於固態發酵產品。而就萃取方式來比較，香杉芝菌絲體及固態發酵產品之70%乙醇萃之抗氧化效果優於熱水萃；若以 EC50 值評估抗氧化性質，結果發現在香杉芝菌絲體部分，除了熱水萃之抗氧化能力外，香杉芝菌絲體70%乙醇萃及熱水萃的 EC50 值都小於 6 mg/mL 而固態發酵產品部分 70%；，乙醇萃的 EC50 值均小於 8 mg/mL。因此，香杉芝菌絲體和香杉芝固

態發酵產品都有良好之抗氧化能力。在抗發炎試驗中，以小鼠巨噬細胞RAW 264.7為實驗模式，探討香杉芝固態發酵產品。香杉芝蕎麥、香杉芝燕麥、香杉芝胚芽米和香杉芝小麥之70%乙醇萃取物，對LPS誘導巨噬細胞發炎反應之影響。由結果可知，70%乙醇萃 取物在 濃度500 μg/ml時 ， 抑制巨噬 細胞分泌NO之效果 是41.02~46.44%；而抑制LPS誘導之巨噬細胞分泌TNF-α，70%乙醇萃取物在濃度500 μg/ml時，抑制巨噬細胞分泌TNF-α之效果為12.55~15.41%，另外，抑制LPS誘導之巨噬細胞產生IL-1β，抑制巨噬細胞分泌IL-1β之效果為34.08~36.92%，而在I

L-6方面，香杉芝固態發酵產品之70%乙醇萃取物在濃度為500 μg/ml時，抑制IL-6之效果為32.85~40.3%。由結果評估，香杉芝發酵產品之70%乙醇萃取物具有抗發炎之活性。綜合上述結果得知，香杉芝菌絲體及香杉芝穀物固態發酵產品皆含有豐富的營養成分、必需胺基酸、鮮味物質和生理活性物質，且具有良好的抗氧化及抗發炎活性。因此，香杉芝穀物之固態發酵產品具有抗氧化及抗發炎作用，且有足夠之營養成分，可開發成為新的膳食補充劑或保健食品。香杉芝燕麥 1%、香杉芝燕麥 2.5%、香杉芝燕麥 5%及 1.66%香杉芝菌絲體取代飼料餵食 28 天後，BALB/c 小鼠之各處理組之臟器相對器官重量及肝臟、

心臟、腎臟及脾臟等器官 H&E 切片結果顯示因餵食香杉芝燕麥1%、香杉芝燕麥 2.5%、香杉芝燕麥 5%及 1.66%香杉芝菌絲體取代飼料對BALB/c 小鼠並無引發組織病變。不同濃度香杉芝燕麥與香杉芝菌絲體取代飼料餵食 BALB/c 小鼠 28 天後，檢測小鼠之血清生化參數、肝與腎功能的血清化學參數之檢驗顯示香杉芝燕麥 1%、2.5%、5%及 1.66%香杉芝菌絲體取代飼料餵食 BALB/c 小鼠 28 天無產生毒性。另外以 7% 的香杉芝菌絲體、7% 四種香杉芝發酵產品取代部分麵粉添加於麵糰中，製成香杉芝菌絲體土司、香杉芝蕎麥土司、香杉芝燕麥土司、香杉芝胚芽米土司與香杉芝小麥土司，分別進行

呈味品質評估、物理性質分析及官能品評分析。結果顯示香杉芝菌絲體及香杉芝發酵產品在一般成分中因含有較高量的蛋白質及纖維，因此製成土司之後口感柔軟，並具有較高的纖維含量。在物理性質分析方面，香杉芝絲體土司及四種香杉芝發酵產品土司的比體積皆符合土司的評分標準。X 射線繞射分析發現六種土司之繞射峰的強度會隨著儲藏時間增加而逐漸增強，且繞射圖譜會由V 型光譜轉變成 B 型光譜。在分析游離胺基酸與核苷酸中，香杉芝菌絲體土司、香杉芝蕎麥土司和香杉芝燕麥土司之呈味成分皆明顯比白土司來得高。在感官品評之消費者喜好性分析上，雖然香杉芝菌絲體土司中特殊之風味及色澤降低消費者的喜好度，但香杉芝發酵產品土司在口感上與白

土司無顯著差異。期望經由添加香杉芝菌絲體及香杉芝菌絲體發酵產品能提供具有健康取向的烘焙食品，以提供消費者有更多樣化的選擇。